Η κινητή φάση είναι ισοδύναμη με την υγρή φάση του αίματος, και υπάρχουν διάφορα πράγματα που πρέπει να προσέξετε κατά τη χρήση. Ανάμεσά τους, υπάρχουν κάποιες «παγίδες» που πρέπει να προσέξουμε.
01. Μετρήστε το pH της κινητής φάσης μετά την προσθήκη οργανικού διαλύτη
Εάν μετρήσετε το pH με ένα οργανικό πρόσθετο, το pH που θα λάβετε θα είναι διαφορετικό από αυτό πριν προσθέσετε τον οργανικό διαλύτη. Ωστόσο, το πιο σημαντικό είναι να είμαστε συνεπείς. Εάν μετράτε πάντα το pH μετά την προσθήκη του οργανικού διαλύτη, φροντίστε να αναφέρετε τα βήματά σας στη μέθοδο που χρησιμοποιείτε, ώστε και άλλοι να ακολουθήσουν την ίδια μέθοδο. Αυτή η μέθοδος δεν είναι 100% ακριβής, αλλά τουλάχιστον θα διατηρήσει τη μέθοδο συνεπή. Αυτό μπορεί να είναι πιο σημαντικό από τη λήψη μιας ακριβούς τιμής pH.
02. Δεν χρησιμοποιείται buffer
Ο σκοπός ενός ρυθμιστικού διαλύματος είναι να ελέγχει το pH και να αποτρέπει την αλλαγή του. Πολλές άλλες μέθοδοι αλλάζουν το pH της κινητής φάσης, γεγονός που μπορεί να προκαλέσει μετατοπίσεις στο χρόνο συγκράτησης, το σχήμα κορυφής και την απόκριση κορυφής.
Το μυρμηκικό οξύ, το TFA κ.λπ. δεν είναι ρυθμιστικά
03. Μη χρήση ρυθμιστικού διαλύματος εντός του κανονικού εύρους pH
Κάθε ρυθμιστικό διάλυμα έχει πλάτος εύρους 2 μονάδων pH, εντός του οποίου παρέχει την καλύτερη σταθερότητα του pH. Τα ρυθμιστικά διαλύματα έξω από αυτό το παράθυρο δεν θα παρέχουν αποτελεσματική αντίσταση στις αλλαγές του pH. Είτε χρησιμοποιήστε ένα ρυθμιστικό διάλυμα στο σωστό εύρος, είτε επιλέξτε ένα ρυθμιστικό διάλυμα που καλύπτει το εύρος pH που χρειάζεστε.
04. Προσθέστε ρυθμιστικό διάλυμα σε οργανικό διάλυμα
Η ανάμειξη ενός ρυθμιστικού διαλύματος με μια οργανική φάση πιθανότατα θα προκαλέσει την κατακρήμνιση του ρυθμιστικού διαλύματος. Σε πολλές περιπτώσεις, ακόμη και αν έχει σημειωθεί βροχόπτωση, εξακολουθεί να είναι δύσκολο να εντοπιστεί. Θυμηθείτε να προσθέτετε πάντα το οργανικό διάλυμα στην υδατική φάση, η οποία μπορεί να μειώσει σημαντικά την πιθανότητα καθίζησης ρυθμιστικού διαλύματος.
05. Αναμείξτε τη βαθμίδα συγκέντρωσης από 0% με μια αντλία
Οι αντλίες που είναι διαθέσιμες σήμερα μπορούν να συνδυάσουν αποτελεσματικά τις κινητές φάσεις και την ενσωματωμένη απαερίωση, αλλά δεν θα έχουν όλοι όσοι χρησιμοποιούν τη μέθοδο σας αντλία υψηλής ποιότητας. Ανακατέψτε τα Α και Β σε ένα ενιαίο διάλυμα και περάστε το 100% ενσωματωμένα.
Για παράδειγμα, μπορούν να παρασκευαστούν 950 ml οργανικού αρχικού μείγματος με ανάμιξη με 50 ml νερού. Το πλεονέκτημα αυτού είναι ότι μπορεί να μειώσει τη μεταβλητότητα μεταξύ των HPLC και να μειώσει την πιθανότητα φυσαλίδων και καθίζησης στο σύστημα. Αξίζει να σημειωθεί ότι η αναλογία του μείγματος της αντλίας είναι 95:5, κάτι που δεν σημαίνει ότι ο προαναμεμιγμένος χρόνος συγκράτησης στη φιάλη είναι επίσης 95:5.
06. Δεν χρησιμοποιείται το σωστό τροποποιημένο οξύ (βάση) για την αλλαγή του ρυθμιστικού διαλύματος
Χρησιμοποιήστε μόνο το οξύ ή τη βάση που σχηματίζει το ρυθμιστικό άλας που χρησιμοποιείτε. Για παράδειγμα, ένα ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου πρέπει να παρασκευάζεται μόνο με φωσφορικό οξύ ή υδροξείδιο του νατρίου.
07. Δεν δηλώνονται όλες οι πληροφορίες σχετικά με το buffer στη μέθοδο, όπως η προσθήκη 5gφωσφορικό νάτριο σε 1000 ml νερό.
Ο τύπος του ρυθμιστικού διαλύματος καθορίζει το εύρος του pH που μπορεί να ρυθμιστεί. Η απαιτούμενη συγκέντρωση καθορίζει την ισχύ του ρυθμιστικού διαλύματος. 5 γραμμάρια ή άνυδρο φωσφορικό νάτριο και 5 γραμμάρια μονοένυδρου φωσφορικού νατρίου έχουν διαφορετική ισχύ ρυθμιστικού διαλύματος.
08. Προσθήκη οργανικών διαλυτών πριν από τον έλεγχο
Εάν η προηγούμενη μέθοδος χρησιμοποιούσε ένα ρυθμιστικό διάλυμα για τη γραμμή βάσης Β και η μέθοδός σας χρησιμοποιεί ένα οργανικό διάλυμα για τη γραμμή βάσης Β, ελπίζουμε ότι μπορείτε να τακτοποιήσετε το ρυθμιστικό διάλυμα στη σωλήνωση της αντλίας και στην κεφαλή της αντλίας.
09. Σηκώστε το μπουκάλι και αδειάστε την τελευταία σταγόνα
Υπάρχει μεγάλη πιθανότητα να μην έχετε αρκετή κινητή φάση για να ολοκληρώσετε ολόκληρη τη διαδρομή και το δείγμα σας να καπνίσει. Εκτός από την πιθανότητα καύσης του συστήματος αντλίας και της στήλης, η κινητή φάση θα εξατμιστεί εντελώς και η κινητή φάση στο πάνω μέρος της φιάλης θα αλλάξει.
10. Χρησιμοποιήστε κινητή φάση απαέρωσης υπερήχων
Το πιο σημαντικό σημείο είναι να βεβαιωθείτε ότι όλα τα ρυθμιστικά άλατα έχουν διαλυθεί, αλλά αυτός είναι ο χειρότερος τρόπος απαέρωσης και θα θερμάνει γρήγορα την κινητή φάση, προκαλώντας την εξάτμιση των οργανικών συστατικών. Για να γλιτώσετε από περιττό πρόβλημα αργότερα, αφιερώστε πέντε λεπτά για να φιλτράρετε με ηλεκτρική σκούπα τη φάση του κινητού σας.
Ώρα δημοσίευσης: Αυγ-27-2024